1 在有機(jī)相與水相混合之后測量pH

pH計是經(jīng)過校準(zhǔn)專門用來準(zhǔn)確測定水溶液的pH值的，因為校準(zhǔn)用的緩沖液是水溶液。如果用來測量混合了有機(jī)相的流動相，結(jié)果會有所偏差。不過最重要的是測量要保持一致性。如果習(xí)慣于混合之后再測pH，也是可以的，只是在發(fā)表方法的時候要注明以便別人按同樣的方法測量。

2 不使用緩沖液

緩沖液是用來保持特定的pH值并緩沖pH值的變化的。很多因素例如樣品基質(zhì)、空氣中的CO2、甚至實驗用水的來源都有可能改變流動相的pH值并造成保留時間的漂移和峰形的變化。（甲酸和TFA并不是緩沖液）

3 緩沖體系選擇錯誤

緩沖鹽的最優(yōu)pH區(qū)間一般是±1pH。超出這個范圍緩沖能力急劇下降。所以在選擇緩沖體系的時候要注意體系的pH適用區(qū)間包含你所需要的pH。

4 將緩沖液加入有機(jī)溶劑

當(dāng)混合流動相的時候，將緩沖液加入有機(jī)溶劑可能會導(dǎo)致緩沖鹽析出的問題，很多情況下析出的的晶體非常微小，肉眼觀察不到，但是會對泵和柱子造成傷害。所以，需要混合流動相的時候，要反過來，將有機(jī)相加入緩沖液中，大多數(shù)情況下可以避免緩沖鹽析出的問題。

5 用泵混合有機(jī)相和水相

雖然新一代的泵能夠非常有效非常精確的混合流動相和在線脫氣，但是并不是所有人都在用最新的儀器，在有些實驗室里，超過二十年的儀器也依然在發(fā)揮作用。所以，在較老的儀器上，預(yù)混合有機(jī)相和水相并且用單通道100%的模式可能會有助于減小極限波動和降低同種方法在不同儀器之間的差異。

6 沒有使用正確的酸堿來調(diào)整緩沖液的pH值

請使用中和后能夠生成相應(yīng)的鹽的酸堿調(diào)整緩沖液的pH值。例如磷酸鈉鹽緩沖液只能使用磷酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值，而不能使用鹽酸或氫氧化鉀。

7 緩沖液配制信息不充分，例如：稱取5g 磷酸鈉溶解進(jìn)1000ml水中

緩沖鹽的類型（例如磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，磷酸鈉）決定了他們的適用pH區(qū)間。摩爾濃度決定了緩沖液的強(qiáng)度。所以一定要說清楚用的具體是什么鹽，緩沖液的摩爾濃度是多少。

8 在不確定HPLC系統(tǒng)的管路中的液體類型的情況下就直接轉(zhuǎn)換成有機(jī)相

如果前次運行管路A中是緩沖鹽，那么直接將其用在有機(jī)相中極有可能造成緩沖鹽析出并堵塞和損壞泵以及相應(yīng)的管路。所以如果不確定就要在使用前用高水相體系沖洗。

9 為了用盡最后一點流動相，傾斜放置溶劑瓶

在試驗中我們經(jīng)常會遇到這種情況：樣品馬上就要測完了，可是流動相液快要見底了。這時候很多人會選擇用最后一點流動相勉強(qiáng)完成實驗或者傾斜溶劑瓶以便管路更好的吸取最后一點流動相。這種做法是不可取的，且不說有空氣進(jìn)入系統(tǒng)的麻煩，流動相成分的改變就會導(dǎo)致很大的誤差。在試驗過程中，流動相中的有機(jī)相會揮發(fā)一部分，所以剛配好的流動相與用了一段時間的流動相會有微小的差異。一般情況下影響不大，隨著剩余溶劑的減少，這個影響是會積累的，所以，不要太摳門了。

10 超聲脫氣

超聲波具有熱效應(yīng)，用超聲波脫氣，特別是長時間脫氣，可能會加速有機(jī)溶劑的揮發(fā)，造成流動相比例變化。所以可以在過濾完流動相的時候，保持真空泵運行五分鐘再倒出流動相。這樣，過濾和脫氣就能一步到位。

注：以上有些經(jīng)驗只適用于預(yù)混合的流動相，比如9和10。

來源：分析化學(xué)